淺談幾種逆轉錄病毒的檢測方法
按照中國藥典三部中，生物制品生產檢定用動物細胞基質制備及質量控制中表1的要求，逆轉錄病毒是細胞內、外源病毒因子檢查中的重要一環，今天我們將就逆轉錄病毒的檢查要求進行總體介紹，并于后續的推文中逐步介紹其檢查方法。
已知雞胚成纖維細胞（CEF）或其他禽源性細胞含有逆轉錄病毒序列，常可產生缺陷型逆轉錄病毒顆粒，逆轉錄酶活性為陽性，對這類細胞進行逆轉錄病毒檢測時，可直接檢測細胞基質中是否存在外源性逆轉錄病毒污染，如禽白血病病毒、禽網狀內皮病腫瘤病毒、感染性內源性逆轉錄病毒。在某些情況下，也可通過監測雞群，以保證無上述感染性逆轉錄病毒污染。
小鼠及其他嚙齒類動物來源的細胞系含有逆轉錄病毒基因序列，可能會表達內源性逆轉錄病毒顆粒，因此，對于這類細胞系，應進行感染性試驗，以確定所表達的逆轉錄病毒是否具有感染性。對于特定嚙齒類細胞（如 CHO、BHK21、NS0 和 Sp2/0），還應確定其收獲液中病毒顆粒的量及其是否有感染性逆轉錄病毒，并應在生產工藝中增加病毒去除和（或）滅活工藝。僅有高度純化且可證明終產品中逆轉錄病毒被清除至低于現行檢測方法的檢測限以下時，方可使用這類細胞。
可采用下列方法對待檢細胞進行逆轉錄病毒的檢測：
一、逆轉錄酶活性測定?
采用敏感的方法，如產物增強的逆轉錄酶活性測定法（ PERT 或 PBRT 法）（生物制品生產檢定用動物細胞基質制備及質量控制 附錄 1 或其他適宜的方法，但靈敏度不得低于現行方法）[1]，但由于細胞中某些成分也具有逆轉錄酶活性；因此，逆轉錄酶陽性的細胞，應進一步確認是否存在感染性逆轉錄病毒。
二、透射電鏡檢查法??
取至少 1×107 個活細胞采用超薄切片法進行透射電鏡觀察。
三、PCR 法或其他特異性體外法??
根據細胞的種屬特異性，在逆轉錄酶活性結果不明確或不能采用逆轉錄酶活性測定時，可采用種屬特異性的逆轉錄病毒檢測法，如逆轉錄病毒 PCR 法、免疫熒光法、ELISA 法等，逆轉錄病毒的定量 PCR 法還可用于逆轉錄病毒顆粒的定量。
四、感染性試驗??
將待檢細胞感染逆轉錄病毒敏感細胞，培養后檢測。根據待檢細胞的種屬來源，須使用不同或多種的敏感細胞進行逆轉錄病毒感染性試驗。
