如何進行峰的純度分析
液相色譜技術 利用四通道紫外檢測器確定峰純度 對于一個色譜峰是否只包含一個或者多個組分的峰純度問題，一般情況下我們會通過選擇PDA檢測器或多次改變測試條件的方式去判定，但具備PDA的單位并不多，而使用普通的單波長檢測器，只能靠原信號或導數信號的峰形狀去判定，這種方法當然很不可靠，因為色譜峰形狀受眾多參數的影響，并在很大程度上取決于色譜的分辨率、信號/噪音。如何才能更好的的解決這一問題呢？基于這種實際問題,戴安率先推出了全數字支持四通道的紫外檢測器UVD170U,采用二極管陣列檢測器的設計方式，實現了四通道實時輸出，再通過原裝變色龍軟件支持，便可以很輕松的輸出比率色譜，并判定峰的純度。其結果可以用圖示方式表示或者以峰純度因子形式的數字量表示。為了增加紫外－可見光譜鑒定的準確性，在進行譜庫檢索之前，最好首先做色譜峰純度檢驗，還需參考標準組分的保留時間，對復雜基體的光譜干擾和基線噪聲干擾也應扣除。 對于一個純化合物，在波長λ1下的摩爾吸光系數應當正比于另一波長λ2下的摩爾吸光系數，即兩個波長下的吸光值比（A λ 1/A λ 2）應為常數。采用多通道檢測技術，測定色譜分離組分在多個不同波長的吸收比，由于此比值與濃度無關，所以當沿色譜峰各點的吸光度比為一常數時，表明該峰是純峰。所謂多通道檢測是指利用計算機技術，用多個波長（一般是最大吸收波長）檢測色譜流出物，通過計算機數據處理，將其吸收比值連續計算予以定性和評價色譜純度。由于不用重復進樣和改變色譜分離條件，大大節約了分析時間，提高了檢測靈敏度和選擇性。故多通道檢測技術中最常用的兩波長的吸光值比率法（比率色譜法）多用于質量控制，如：藥物的純度控制，成分復雜的中藥分析等。而中研究分析中應用不太廣泛。 多重吸收比率法的原理與兩個波長的吸光值比率法相近。不只是用兩個波長，而是相對于最大吸收波長所有波長做出比率圖。程度重復檢索出每一光譜的最大吸收波長，并據此重建色譜信號，再沿整個色譜圖畫出其它波長的色譜信號比率。由這一程序就很快地觀察到在整個色譜圖上所有峰的純度情況。 ●純度測定方法應選用色譜法，并采用兩種以上不同分離機理或不同色譜條件并經驗證的色譜方法相互驗證比較，同時采用二極管陣列檢測器或其它適宜方法檢測HPLC法的色譜峰純度，而后根據測定結果經統計分析確定對照品(標準品)原料的純度。 1、 定性氣相色譜儀一般都串接兩個檢測器：TCD（熱導檢測器）和FID（氫火焰離子化檢測器），利用雙通道色譜工作站，可以同時獲得兩個檢測器的信號。不同物質，兩個檢測器信號的比值一般是不同的，這個特點可以作為物質定性的依據之一。與此類似，如果液相色譜儀上串接有UV（紫外檢測器）和ELSD（蒸發光散射檢測器），那么是否可以兩個檢測器信號的比值作為物質定性的一個依據呢？2、 定量Water 今年推出的2487雙波長紫外檢測器，其中一個特點就是說它可以進行峰純度檢查（但好像Waters的Breeze軟件并不能給出峰的純度評價，也許是我還不知道吧）。下面是Waters Breeze 軟件采集的Ratio Plot，即兩個不同波長通道采集的信號的比例圖。 樣品1樣品2對照與此類似，如果液相色譜儀上串接有UV（紫外檢測器）和ELSD（蒸發光散射檢測器），那么是否可以用兩個不同檢測器通道采集的信號的比例圖來進行峰純度的評價呢？我們都知道，紫外圖譜是定性效果最差的。兩個不同波長的吸收比值并不能作為定性參數。雙波長檢查峰純度的原理是，如果從峰起點到峰終點，洗脫出來的是同一物質，那么，兩個波長的信號（實際上就是吸收度）比值應該相同，從上面對照圖我們可以看到這一點，起點到終點基本成一直線。 3、 色譜工作站軟件的改進建議 算法建議如下： 1首先假設，兩個檢測器上的信號和被測物質的濃度成線性關系，則兩個線性關系相除后仍然線性的。（ELSD的檢測信號有時候和物質濃度不成正比，這就需要先進行轉換） 計算AB線段上的點的進行線性擬合，峰純度原高，線性關系越好。然后，計算樣品和對照擬合的線性方程的夾角。理想情況下，基線如果是平直的直線（Y=b），色譜峰100%純，那么，峰起點到終點的線段的線性關系應該為1，夾角應該為0度，而且直線方程應該是Y=B的形式。我們可以把兩個參數統一起來 峰純度=相關系數×夾角的余弦值 Purity=r×cosθ 利用四通道紫外檢測器確定峰純度 對于一個色譜峰是否只包含一個或者多個組分的峰純度問題，一般情況下我們會通過選擇PDA檢測器或多次改變測試條件的方式去判定，但具備PDA的單位并不多，而使用普通的單波長檢測器，只能靠原信號或導數信號的峰形狀去判定，這種方法當然很不可靠，因為色譜峰形狀受眾多參數的影響，并在很大程度上取決于色譜的分辨率、信號/噪音。如何才能更好的的解決這一問題呢？基于這種實際問題,戴安率先推出了全數字支持四通道的紫外檢測器UVD170U,采用二極管陣列檢測器的設計方式，實現了四通道實時輸出，再通過原裝變色龍軟件支持，便可以很輕松的輸出比率色譜，并判定峰的純度。其結果可以用圖示方式表示或者以峰純度因子形式的數字量表示。為了增加紫外－可見光譜鑒定的準確性，在進行譜庫檢索之前，最好首先做色譜峰純度檢驗，還需參考標準組分的保留時間，對復雜基體的光譜干擾和基線噪聲干擾也應扣除。 對于一個純化合物，在波長λ1下的摩爾吸光系數應當正比于另一波長λ2下的摩爾吸光系數，即兩個波長下的吸光值比（A λ 1/A λ 2）應為常數。采用多通道檢測技術，測定色譜分離組分在多個不同波長的吸收比，由于此比值與濃度無關，所以當沿色譜峰各點的吸光度比為一常數時，表明該峰是純峰。所謂多通道檢測是指利用計算機技術，用多個波長（一般是最大吸收波長）檢測色譜流出物，通過計算機數據處理，將其吸收比值連續計算予以定性和評價色譜純度。由于不用重復進樣和改變色譜分離條件，大大節約了分析時間，提高了檢測靈敏度和選擇性。故多通道檢測技術中最常用的兩波長的吸光值比率法（比率色譜法）多用于質量控制，如：藥物的純度控制，成分復雜的中藥分析等。而中研究分析中應用不太廣泛。 多重吸收比率法的原理與兩個波長的吸光值比率法相近。不只是用兩個波長，而是相對于最大吸收波長所有波長做出比率圖。程度重復檢索出每一光譜的最大吸收波長，并據此重建色譜信號，再沿整個色譜圖畫出其它波長的色譜信號比率。由這一程序就很快地觀察到在整個色譜圖上所有峰的純度情況。 ●純度測定方法應選用色譜法，并采用兩種以上不同分離機理或不同色譜條件并經驗證的色譜方法相互驗證比較，同時采用二極管陣列檢測器或其它適宜方法檢測HPLC法的色譜峰純度，而后根據測定結果經統計分析確定對照品(標準品)原料的純度。 1、 定性氣相色譜儀一般都串接兩個檢測器：TCD（熱導檢測器）和FID（氫火焰離子化檢測器），利用雙通道色譜工作站，可以同時獲得兩個檢測器的信號。不同物質，兩個檢測器信號的比值一般是不同的，這個特點可以作為物質定性的依據之一。與此類似，如果液相色譜儀上串接有UV（紫外檢測器）和ELSD（蒸發光散射檢測器），那么是否可以兩個檢測器信號的比值作為物質定性的一個依據呢？2、 定量Water 今年推出的2487雙波長紫外檢測器，其中一個特點就是說它可以進行峰純度檢查（但好像Waters的Breeze軟件并不能給出峰的純度評價，也許是我還不知道吧）。下面是Waters Breeze 軟件采集的Ratio Plot，即兩個不同波長通道采集的信號的比例圖。 樣品1樣品2對照與此類似，如果液相色譜儀上串接有UV（紫外檢測器）和ELSD（蒸發光散射檢測器），那么是否可以用兩個不同檢測器通道采集的信號的比例圖來進行峰純度的評價呢？我們都知道，紫外圖譜是定性效果最差的。兩個不同波長的吸收比值并不能作為定性參數。雙波長檢查峰純度的原理是，如果從峰起點到峰終點，洗脫出來的是同一物質，那么，兩個波長的信號（實際上就是吸收度）比值應該相同，從上面對照圖我們可以看到這一點，起點到終點基本成一直線。 3、 色譜工作站軟件的改進建議 算法建議如下： 1首先假設，兩個檢測器上的信號和被測物質的濃度成線性關系，則兩個線性關系相除后仍然線性的。（ELSD的檢測信號有時候和物質濃度不成正比，這就需要先進行轉換） 計算AB線段上的點的進行線性擬合，峰純度原高，線性關系越好。然后，計算樣品和對照擬合的線性方程的夾角。理想情況下，基線如果是平直的直線（Y=b），色譜峰100%純，那么，峰起點到終點的線段的線性關系應該為1，夾角應該為0度，而且直線方程應該是Y=B的形式。我們可以把兩個參數統一起來 峰純度=相關系數×夾角的余弦值這樣，r=1，θ=0時，純度為1，即100%
