如何通過瓊脂糖凝膠來鑒定質粒DNA的純度
質粒DNA分子具有三種構型：共價閉合環開DNA（cccDNA,SC構型）、開環DNA（OC構型）和線性分子（L構型）.在細菌體內,質粒DNA是以負超螺旋構型存在的.在瓊脂糖凝膠電泳中不同構型的的同一種質粒DNA,盡管分子量相同,但具有不同的電泳遷移率.其中跑在最前沿的是共價閉合DNA,其后依次是線性DNA和開環DNA,其原因是共價閉合的DNA其空間位阻最小,所以跑得最快.而開環DNA空間位阻最大,所以跑得最慢. 這些結論都是經得起實驗考驗的,我在做質粒的上有沒有這個酶切位點鑒定的時候,我就會用原質粒和經過單酶切的質粒在同一塊膠上進行電泳,看單酶切后的質粒是不是比原質粒跑得快從而鑒定出質粒有沒有被切開.這個也分子生物學領域應用很廣泛,PCR-RFLP方法就是基于這個原理進行限制性內切酶圖譜方面的鑒定的.
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