實驗動物等級及其飼育環(huán)境的技術(shù)指標
按照《GB 14925-2001實驗動物 環(huán)境及設(shè)施國家標準》規(guī)定，實驗動物是指經(jīng)人工飼育，對其攜帶微生物實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚的用于科學研究、教學、生產(chǎn)、檢定以及其他科學實驗的動物。在微生物控制方面，實驗動物分為四個等級：
????? 一級 普通動物(conventional animal: CV)
????? 普通動物不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原和動物烈性傳染病的病原。
????? 二級 清潔動物(clean animal: CL)
????? 清潔動物除要求必須不帶有人獸共患病原和烈性傳染病病原及常見傳染病病原之外，還要求排除對科學實驗研究干擾大的病原體的動物。清潔級動物已是我國目前主要使用的質(zhì)量控制等級的動物，已被廣泛地應(yīng)用于生命科學研究、新藥研制和安全評價等領(lǐng)域的動物實驗之中，發(fā)揮了清潔級動物，易于質(zhì)量控制，非實驗因素干擾少，有較好的敏感性和可重復(fù)性的優(yōu)點。
????? 三級 無特定病原體動物(specific pathogen free animal: SPF)
????? 無特定病原體動物是指機體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲存在的動物，但非特定的微生物和寄生蟲是容許存在的。故實際上是指無傳染病的健康動物。這類動物是目前國外使用最廣泛的實驗動物，它的來源，既可來自無菌動物繁育的后裔，亦可經(jīng)剖胎取后，在隔離屏障設(shè)施的環(huán)境中，由SPF親代動物撫育。它不帶有對人或動物本身致病的微生物，但不能排除可經(jīng)胎盤屏障垂直傳播的微生物。
????? 四級 無菌動物(germ free animal: GF)和悉生動物(Gnotobiotic animal: GN)
????? 無菌動物是指除清潔動物應(yīng)排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對科學實驗干擾大的病原。無菌動物是在無菌屏障系統(tǒng)中，剖腹取出胎兒，飼養(yǎng)繁育在無菌隔離器中，飼料、飲水經(jīng)過消毒，定期檢驗，證明動物體內(nèi)外均無一切微生物和寄生蟲（包括大部分病毒）的動物。無菌動物的“菌”主要是指細菌，而嚴格來說，還包括真菌、立克次氏體、支原體和病毒等微生物及各種寄生蟲。而所謂“無”卻不是絕對的，不過是根據(jù)現(xiàn)有的科學知識和檢查方法在一定時期內(nèi)不能檢出已知的微生物和寄生蟲而已。隨著科學技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在認為是無菌的動物或許將來可以檢出微生物和寄生蟲而不是無菌動物，因為這個“無”是相對而言的。到目前為至，尚未確立無菌動物的微生物檢定法，因此，研究者的檢定方法各式各樣，其中病毒和立克氏體的檢查尚有相當多的問題。例如，在無菌動物中供實驗室使用最多的無菌小鼠，用電子顯微鏡檢查證明，胸腺細胞中仍有存在白血病病毒的例子，因而，現(xiàn)在的所謂無菌動物，指動物體內(nèi)外未能檢出細菌、真菌、原蟲、內(nèi)外寄生蟲的動物較妥當。悉生動物也稱已知菌動物或已知菌叢動物（Anima with Known Bacterial Flora），是指用與無菌動物相同的方法取得飼養(yǎng)（剖腹取胎，在隔離器內(nèi)飼養(yǎng)）、但明確的物體內(nèi)所給予的已知微生物的動物，即凡含有已知的單菌（Monoxenie）、雙菌（Dixenie）、三菌（Trixenie）或多菌（Polyxenie）的動物。由于悉生動物和無菌動物一樣是放在無菌隔離器內(nèi)飼養(yǎng)的，因此選用此種動物作實驗準確性是很高的，可排除動物體內(nèi)帶有的各種不明確的微生物對實驗結(jié)果的干擾，常用于研究微生物和宿主動物之間的關(guān)系，并可按研究目的來選擇某種微生物。
?
????? 不同等級的實驗動物需要在不同等級的環(huán)境和設(shè)施中飼育，實驗動物飼育環(huán)境分為三類，即普通環(huán)境、屏障環(huán)境、隔離環(huán)境。每類環(huán)境都有嚴格的技術(shù)標準，詳見表1和表2。普通環(huán)境：該環(huán)境設(shè)施符合動物居住的基本要求，不能完全控制傳染因子，適用于飼育教學等用途的普通級實驗動物。屏障環(huán)境：該環(huán)境設(shè)施適用于飼育CL實驗動物及SPF實驗動物。進入屏障的人、動物和物品必須經(jīng)過嚴格的微生物控制。空氣經(jīng)低效、中效、高效過濾器進入屏障系統(tǒng)，結(jié)凈度達到10000級，利用空調(diào)送風系統(tǒng)形成清潔走廊、動物房、污染走廊、室外的靜壓差梯度，以防止空氣逆向形成的污染。空氣、人、動物、物品的走向采用單向流通路線。工作人員工作時要在淋浴后穿著無菌工作服、口罩、帽子以盡量減少和動物的直接接觸。?隔離環(huán)境：該環(huán)境設(shè)施采用無菌隔離裝置以保存無菌或無外來污染動物。隔離裝置內(nèi)的空氣、飼料、水、墊料和設(shè)備均為無菌，動物和物料的動態(tài)傳遞須經(jīng)特殊的傳遞系統(tǒng)，該系統(tǒng)既能保證與環(huán)境的絕對隔離，又能滿足轉(zhuǎn)運動物時保持內(nèi)環(huán)境一致。該環(huán)境設(shè)施適用于飼育SPF、悉生（Gnotobiotic）及無菌（germ free）實驗動物。工作人員只能通過隔離裝置上的橡膠手套來進行飼養(yǎng)或?qū)嶒灐Ｎ锲肥峭ㄟ^包裝消毒后，由滅菌渡艙或傳遞窗傳入；動物是經(jīng)由無菌剖腹產(chǎn)的方法進入；進入隔離裝置的空氣，應(yīng)經(jīng)高效過濾，保證隔離裝置內(nèi)空氣潔凈度達100級，無菌并維持正壓狀態(tài)。根據(jù)實驗需要也可維持負壓狀態(tài)，但需要配置空氣排放裝置，保證空氣排放符合標準。
表1? 實驗動物繁育、生產(chǎn)設(shè)施環(huán)境指標（靜態(tài)）
項 目 | 指 標 | ||||||
小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠 | 犬、猴、貓、兔、小型豬 | 雞 | |||||
普通環(huán)境 | 屏障環(huán)境 | 隔離環(huán)境 | 普通環(huán)境 | 屏障環(huán)境 | 隔離環(huán)境 | 屏障環(huán)境 | |
溫度，℃ | 18～29 | 20～26 | 16-28 | 20-26 | 16-28 | ||
日溫差，℃≤ | - | 4 | - | 4 | 4 | ||
相對溫度，% | 40-70 | ||||||
換氣次數(shù)，次/h | 8-10 | 10-201 | 20-50* | 8-10 | 10-201 | 20-501 | 10-202 |
氣流速度，m/s | 0.1-0.2 | ||||||
壓強梯度，Pa | - | 20-502 | 100-150 | - | 20-502 | 100-150 | 20-502 |
空氣潔凈度，級 | - | 10000 | 100 | - | 10000 | 100 | 10000 |
菌數(shù)，個/皿≤ | 30 | 3 | 無檢出 | 30 | 3 | 無檢出 | 3 |
氨濃度 mg/m3 ≤ | 14 | ||||||
噪聲dB ≤ | 60 | ||||||
照度，lx | 工作照度 | 150-300 | |||||
動物照度 | 15-20 | 100-200 | 5-10 | ||||
晝夜明暗交替時間，h | 12/12或10/14 | ||||||
注：表中氨濃度指標為動態(tài)指標。 1一般采用全新風，保證動物室有足夠的新鮮空氣。如果先期去除了粉塵顆粒物和有毒有害氣體，不排除使用循環(huán)空氣的可能，但再循環(huán)空氣僅限于同一單元，新鮮空氣不得少于50%。并保證供風的溫、濕度參數(shù)。 2單走廊設(shè)施必須保證飼育室、實驗室壓強最高。 |
?
表2 動物實驗設(shè)施（設(shè)備3）環(huán)境指標（靜態(tài)）
項 目 | 指 標 | ||||||
小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠 | 犬、猴、貓、兔、小型豬 | 雞 | |||||
普通環(huán)境 | 屏障環(huán)境 | 隔離環(huán)境 | 普通環(huán)境 | 屏障環(huán)境 | 隔離環(huán)境 | 屏障環(huán)境 | |
溫度，℃ | 19-26 | 20-25 | 16-26 | 18-22 | 16-26 | ||
日溫差，℃ ≤ | 4 | 3 | 4 | 3 | 3 | ||
相對濕度，% | 40-70 | ||||||
換氣次數(shù)，次/h | 8-10 | 10-201 | 20-501 | 8-10 | 10-201 | 20-501 | 20-501 |
氣流速度，m/s | 0.1-0.2 | ||||||
壓強梯度，Pa | - | 20-502 | 100-150 | - | 20-502 | 100-1502 | 100-150 |
空氣潔凈度，級 | - | 10000 | 100 | - | 10000 | 100 | 100 |
落下菌數(shù)，個/皿 ≤ | 30 | 3 | 無檢出 | 30 | 3 | 無檢出 | 無檢出 |
氨濃度 mg/m3 ≤ | 14 | ||||||
噪聲 dB ≤ | 60 | ||||||
照度，lx | 工作照度 | 150-300 | |||||
動物照度 | 15-20 | 100-200 | 5-10 | ||||
晝夜明暗交替時間，h | 12/12或10/14 | ||||||
注：表中氨濃度指標為動態(tài)指標。 1一般采用全新風，保證動物房有足夠的新鮮空氣。如果先期去除了粉塵顆粒物和有毒有害氣體，不排除使用循環(huán)空氣的可能，但再循環(huán)空氣應(yīng)取自于無污染區(qū)域或同一單元，新鮮空氣不得少于50%，并保證供風的溫、濕度參數(shù)。 2單走廊設(shè)施必須保證飼育室、實驗室壓強最高。 3此處動物實驗設(shè)備系指動物飼養(yǎng)和實驗時，保障動物所處的局部環(huán)境應(yīng)達到本環(huán)境指標的設(shè)備。 |
?
參考文獻
1、中華人民共和國國家標準 GB 14925-2001實驗動物 環(huán)境及設(shè)施
