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蛋白質分段鹽析原理及實驗步驟

2023.6.01

對分離目的蛋白的鹽析,最好采用分段鹽析。
由于不同的蛋白質其溶解度與等電點不同,
沉淀時所需的pH值與離子強度也不相同,
改變鹽的濃度與溶液的pH值,
可將混合液中的蛋白質分批鹽析分開,
這種分離蛋白質的方法稱為分段鹽析法(fractional
saltingout)。如半飽和硫酸銨可沉淀血漿球蛋白,
飽和硫酸銨則可沉淀包括血漿清蛋白在內的全部蛋白質。
1.
分段鹽析的條件先需要進行小實驗探索,如:先進行0%-30%
的硫酸銨沉淀,再進行30%-60%的硫酸銨沉淀,
最后進行60%-80%的硫酸銨沉淀。
2.
每一段鹽析靜置之后都將離心取沉淀,透析并檢測活性。
通過實驗結果可以看出哪一段鹽析出來的目的產物最多,
相對來說雜質就更少。
3.
比如實驗中的活性物質主要在60%-80%這段出來,
在以后的實驗中,就可以首先進行0%-60%的硫酸銨沉淀,
這段沉淀物可以拋棄(去處大多數雜質);然后進行60%-80%
的硫酸銨沉淀,
這段沉淀出來是物質是所需要的目的物質含量比較高的物質,
將其收集進行下一步純化工作。

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