影響質粒DNA提取的因素有哪些
這個要看是用試劑盒提還是手提。
試劑盒提取的話就很方便很好操作，試劑、吸附柱什么都是商品級的，問題都不大，主要是看你培養的菌質量如何，如果培養菌是挑取的是假陽性或者是培養基抗性出問題，就會因為質粒沒有或者量過少而檢測不出來，其次的話就是Buffer要加的是無水乙醇，不能加錯，其他操作按說明書就沒有問題。
手提的話需要質粒提取因素就很多了，這里有總結的很好的你可以看一下：
1、手提中主要是試劑對質粒DNA提取的影響較大，其中溶液Ⅰ，加入的葡萄糖可以使懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子底部。EDTA是Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑，可以抑制DNase的活性和微生物生長。此步驟菌體一定要懸浮均勻，不能有結塊，否則會降低抽提得率。
2、溶液II中，NaOH是最佳的溶解細胞的試劑，不管是大腸桿菌還是哺乳動物細胞，碰到了堿后幾乎在瞬間就會溶解，這是由于細胞膜發生了從bilaye（雙層膜）結構向micelle（微囊）結構的相變化所導致。SDS也呈堿性，但如果只用SDS，達不到徹底溶解細胞的作用，加入SDS主要為下一步做鋪墊。這一步操作要注意兩點：第一，時間不能過長，因為在這樣的堿性條件下基因組DNA片斷會慢慢斷裂；第二，必須溫柔混合，不然基因組DNA也會斷裂。
3、對于溶液Ⅲ，SDS在高鹽濃度下發生沉淀，同時SDS能與蛋白質結合，平均兩個氨基酸上結合一個SDS分子，所以沉淀也將溶液中的大部分蛋白質沉淀下來。溶液中的K+置換了SDS中的Na+而形成了不溶性的PDS，高濃度的鹽使沉淀更完全。同時，由于基因組DNA很長，容易被PDS共沉淀。2M的醋酸可以中和NaOH，因為長時間的堿性條件會打斷DNA。基因組DNA一旦發生斷裂，小于100kb的片斷，就不容易與PDS共沉淀。所以堿處理的時間要短，而且不得激烈振蕩，否則最后得到的質粒上會有大量的基因組DNA污染。這一步操作混合均勻后在冰上放置，可以使PDS沉淀更充分。
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