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PCR擴增后沒有條帶是怎么回事

2021.11.14

PCR的反應條件與很多參數有關系。如模板濃度,引物長度及GC含量,引物濃度,dNTPs濃度,選用的taq enzyme,緩沖液的離子含量,產物大小,變性時間,退火溫度及時間,延長的時間。

物理原因:變性對PCR擴增來說相當重要,如變性溫度低,變性時間短,極有可能出現假陰性;退火溫度過低,可致非特異性擴增而降低特異性擴增效率退火溫度過高影響引物與模板的結合而降低PCR擴增效率。

有時還有必要用標準的溫度計,檢測一下擴增儀或水溶鍋內的變性、退火和延伸溫度,這也是PCR失敗的原因之一。

靶序列變異:如靶序列發生突變或缺失,影響引物與模板特異性結合,或因靶序列某 段缺失使引物與模板失去互補序列,其PCR擴增是不會成功的。


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